一般來說，沒有感染過乙型肝炎病毒的人應該注射乙型肝炎疫苗。重點應用者有兩部分，一部分是新生兒、學齡前兒童，特別是病毒攜帶者的新生兒，另一部分是危險羣體，包括接觸乙型肝炎患者的醫務人員、直接接觸血液、分泌物的醫務人員、乙型肝炎患者和乙型肝炎病毒攜帶者的配偶、家庭成員或密切接觸者。
接種乙型肝炎疫苗後，未必能預防乙型肝炎病毒感染和乙型肝炎發病，只有注射疫苗後能產生足夠抗體的人才具有預防作用，足夠抗體指乙型肝炎病毒表面抗體滴度在1:10以上。注射後產生的保護性抗體不是永久性的，一般只能維持3~25年，今後必須在醫生的指導下加強注射。
注射乙型肝炎疫苗後產生的足量抗體只能預防乙型肝炎病毒感染和乙型肝炎發病。對其他類型的病毒性肝炎沒有預防作用。接種者還可能感染甲、丙、戊、庚肝等病毒。注射乙型肝炎疫苗前，必須檢查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、表面抗體(抗-HBs)和核心抗體(抗-HBc)，檢查結果陰性者可注射，2歲以內的兒童無密切接觸史，無檢查，直接注射乙型肝炎疫苗。
